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Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52

簡要描述:Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52
(1)DE52纖維素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待純化標(biāo)本:雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
(4)1.5×50cm 層析柱;透析袋;紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材

  • 產(chǎn)品型號:C8930-100
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-08-07
  • 訪  問  量:3022

詳細(xì)介紹

Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52

產(chǎn)品信息:  

    纖維素DE-52為中等堿性陰離子交換劑,柱層析用于吸附劑,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等各種生物高分子。

纖維素DE-52提取法純化多克隆抗體

該法提取IgG簡便,既可小量提取,也可大量制備。

1.批量提取法 稱取DEAE-纖維素(DE52)50g,置于1000ml燒杯中,先以蒸餾水漂浮除去細(xì)顆粒,再經(jīng)酸堿處理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液(PB)平衡。將水分抽干,或用布氏濾斗(內(nèi)放兩層濾紙)過濾,收集濕纖維素,以降低其離子強(qiáng)度。按1ml血清加濕重5g DE52,經(jīng)過充分?jǐn)嚢?,?℃吸附1h。上清液可再如此處理一次,即獲得較純的IgG。該法提取IgG簡便,既可小量提取,也可大量制備。

2.Tris-Cl離子交換層析法(Ion-exchange chromatography)

【材料和試劑】

(1)DE52纖維素。

(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。

(3)待純化標(biāo)本:雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。

(4)1.5×50cm 層析柱;透析袋;紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材。

【操作步驟】   Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52

(1)DE52纖維素的處理:DE52經(jīng)酸、堿處理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。

(2)裝柱:將層析柱固定于滴定架上,柱底墊一圓形尼龍紗,出口接一細(xì)塑料管并關(guān)閉出水。將浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高時,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松開出水口螺旋夾,控制流速1~2ml/min,同時連續(xù)加入DE52至所需高度。待DE52*沉降后,柱面放一圓形濾紙片。

(3)平衡:松開出水口螺旋夾,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速為15滴/min,待流出液與洗脫液之pH值達(dá)到*時,停止平衡。

(4)待提取樣品的準(zhǔn)備:將蛋白裝入透析袋里,置4℃冰箱,對0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析。

(5)加樣、洗脫與收集:用吸管吸去柱面液體,以毛細(xì)吸管沿柱壁加入樣品,樣品體積相當(dāng)于柱床體積的1%~2%,蛋白濃度為50~70mg。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進(jìn)入柱床內(nèi),并用少量洗脫液清洗柱壁;待液體進(jìn)入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脫,控制流速為14~16滴/min。分部收集器收集,紫外監(jiān)測,或人工收集,以紫外分光光度計分別測定每管280nm OD值,描繪洗脫液峰。

(6)濃縮:將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合并,裝入透析袋,以PEG濃縮至所需體積。

Tris-PO4離子交換層析法

該法在上述方法的基礎(chǔ)上稍加改良,即通過梯度洗脫,可用于血清中IgG和IgM的提取。

【材料和試劑】     

(1)DE52纖維素。

(2)待純化標(biāo)本:雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。

(3)1.5×50cm 層析柱;透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材。

(4)梯度洗脫液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。

【操作步驟】

(1)蛋白標(biāo)本對0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。

(2)DE52裝柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。

(3)加樣,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脫,紫外監(jiān)測直至洗脫液280nm OD回到基線。這一步驟可除去血清中其他蛋白。

(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脫,這一步驟可用于純化血清IgG和IgM。

(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脫,總量收集250ml;重復(fù)步驟(5)。

(6)根據(jù)280nm峰值合并蛋白峰,透析濃縮和保存同上。

用過的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脫回收。再用蒸餾水洗至中性,加入0.02%疊氮鈉于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

性質(zhì)用途

性狀:干燥細(xì)結(jié)晶或纖維狀

基質(zhì) 高度交聯(lián)纖維素

配基 二乙基氨基乙基

配基密度 40μmol /ml

吸附載量 180mg HSA/ml

填料的顆粒大小 50μm

zui大流速 300cm/h

pH范圍 3-10,在位清洗時pH范圍可到2-11

化學(xué)穩(wěn)定性 各種緩沖液及鹽,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M鹽酸胍,乙醇,異丙醇等

物理穩(wěn)定性 0.1M中性緩沖液中,120℃30min

層析柱裝填

  1. 吸附性層析一般建議裝填高度為 10~15cm ,分子篩建議裝填高度為60~90cm

1組裝柱如有需要連接裝柱器。

2取下下柱頭用裝柱緩沖液沖洗柱底適配器排除篩網(wǎng)下面的氣泡,將下柱頭安裝

在層析柱底部旋緊調(diào)整旋鈕,并在層析柱底部保留 1cm 左右高度的液體。

3用裝柱緩沖液重懸介質(zhì),制成 50%~75%左右的介質(zhì)懸浮液。

4一次性將介質(zhì)倒入柱管中避免產(chǎn)生氣泡。

5如連接有裝柱器立即往裝柱器中緩慢加入裝柱緩沖液。將適配器或裝柱器上蓋

與層析系統(tǒng)相連接。

6設(shè)定所需流速+,打開柱下端,啟動泵,進(jìn)行壓柱。

7柱床穩(wěn)定后保持 30min 以上,關(guān)閉泵和底閥

8如連接有裝柱器,移除裝柱器后連接適配器。

9調(diào)節(jié)適配器,使其固定在膠面上 0.5~1cm 并保證適配器入口充滿液體。

10打開底閥,連接泵繼續(xù)用設(shè)定的流速注意壓力不要超過 0.3Mpa繼續(xù)壓柱

待膠面高度保持不變,標(biāo)記此時膠面高度

11暫停機(jī)器關(guān)閉底閥,斷開柱頭入口,調(diào)低適配器至膠面下 3~5mm 處。封閉

上柱口,裝柱完成。

 

蛋白層析柱/蛋白純化柱(一端柱床可調(diào),螺紋型)
內(nèi)徑(mm)耐壓(bar)床層高度(mm)床層體積(mL)床層高度(mm)貨號(玻璃)
1051000-70-100LK10100
102004月15日55-200LK10200
1040020-31255-400LK10400
1060035-47455-600LK10600
1080051-62655-800LK10800
10100067-78855-1000LK101000
1551000-170-100LK15100
152009.7-35.355-200LK15200
1540045-70255-400LK15400
1560080-106455-600LK15600
15800116-141655-800LK15800
151000151-176855-1000LK151000
2051000-310-100LK20100
2020017-6355-200LK20200
2040080-126255-400LK20400
20600143-188455-600LK20600
20800205-251655-800LK20800
201000268-314855-1000LK201000
2551000-490-100LK25100
2520027-9855-200LK25200
25400125-196255-400LK25400
25600223-294455-600LK25600
25800321-392655-800LK25800
251000419-490855-1000LK251000
3751000-1070-100LK37100
3720059-21455-200LK37200
37400274-430255-400LK37400
37600488-644455-600LK37600
37800703-859655-800LK37800
371000918-1074855-1000LK371000
5051000-1960-100LK50100
50200108-39255-200LK50200
50400500-785255-400LK50400
50600893-1177455-600LK50600
508001285-1570655-800LK50800
5010001678-1962855-1000LK501000

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