中壓層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體,一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)不同,從而分離的一種層析法。
它的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于柱床面上。
此外,直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,柱床必須有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關(guān)。
主要特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)
1.高分離效率:在中壓條件下,流動(dòng)相的流速加快,從而提高了分離效率,尤其適用于快速純化需求。
2.良好的生物兼容性:采用醫(yī)療級(jí)聚丙烯材質(zhì),對(duì)生物樣品具有良好的兼容性,減少了樣品污染和損失的風(fēng)險(xiǎn)。
3.靈活適用性:中壓層析柱可以裝填免疫親和、離子交換、凝膠過(guò)濾和反相等多種層析介質(zhì),使其能夠廣泛應(yīng)用于抗體、蛋白和其他生物分子的純化。
4.串聯(lián)使用能力:多個(gè)中壓層析柱可以串聯(lián)使用,進(jìn)一步增強(qiáng)純化性能,滿足更復(fù)雜的純化需求。
應(yīng)用領(lǐng)域
1.蛋白純化:廣泛用于抗原抗體、重組蛋白的純化,如使用CommaX™ rProtein A, G, A/G預(yù)裝柱進(jìn)行抗體純化。
2.核酸純化:適用于核酸的分離和提純,特別是對(duì)于那些需要高純度核酸的應(yīng)用。
3.多肽和其他分子的純化:還可用于純化多肽和其他小分子,如使用CommaX™ His純化預(yù)裝柱進(jìn)行標(biāo)記蛋白純化。
下面讓我們一起來(lái)了解一下中壓層析柱過(guò)柱的技巧吧:
按過(guò)柱時(shí)的壓力可以分為:加壓,常壓,減壓。壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度,減少產(chǎn)品收集的時(shí)間,但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候,常壓柱是效率較高的,但是時(shí)間也較長(zhǎng),例如一些天然化合物的分離,有時(shí)一個(gè)柱子過(guò)幾個(gè)月也有可能。
減壓柱能夠減少硅膠的使用量,但是由于大量的空氣通過(guò)硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā),有時(shí)會(huì)在柱子外面有水汽凝結(jié),另外有些比較易分解的東西可能得不到,而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣,噪音大,時(shí)間長(zhǎng),所以減壓過(guò)柱用得比較少。
加壓過(guò)柱是一種比較好的方法,與常壓柱類似,但用外加壓力可以使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣,雙連球或者小氣泵(用魚缸供氣的加壓泵就行)。特別是在容易分解的樣品的分離中很適用。
一般壓力不可過(guò)大,不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。因?yàn)榧訅哼^(guò)柱效率高,分離效果較好,所以加壓過(guò)柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是非常適用的。
一些低沸點(diǎn)溶劑裝柱時(shí)往往會(huì)在柱子中產(chǎn)生氣泡,使柱子變花,利用加壓過(guò)柱法在裝柱時(shí)就可以有效地解決這個(gè)問(wèn)題,而且可以使柱子很快裝實(shí)。
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