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看完本篇你就知道什么是蛋白層析柱了

更新時間:2024-08-08      點擊次數:2356

  蛋白質是生命活動的物質基礎,也是生物體內的功能性大分子。隨著分子生物學、結構生物學、生物制藥行業(yè)等研究的不斷深入,蛋白質純化成為近年來越來越熱的研究話題。

  蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段兩個階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如RNA、DNA 等分開,常用的方法為硫酸銨沉淀法。

  精細純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質接近的蛋白區(qū)分開來,常用的方法有:凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、親和層析等。其中,凝膠過濾層析是常見的純化手段之一。

  蛋白層析柱是一種根據分子大小從混合物中分離蛋白質的方法。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異,在混合物通過含有填充顆粒的凝膠過濾層析柱時,由于各種蛋白的分子大小不同,擴散進入特定大小孔徑顆粒內的能力也各異,大的蛋白分子會被先洗脫出來,分子越小,越晚洗脫,從而達到分離蛋白的目的。

  凝蛋白層析柱中的填料大多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質,在不同的流動相中溶脹變化差異比較大,因此,蛋白層析柱管也不同一般的玻璃柱,柱床長度通常可調節(jié),分為一端可調軸向壓縮和兩端可調軸向壓縮柱。匯通色譜現(xiàn)推出BSXK夾套式蛋白層析柱和Better Glass系列蛋白層析柱,廣泛應用于蛋白、多肽、抗體、酶、病毒、重組蛋白等生物分子純化。

 

  下面讓我們來了解一下蛋白層析柱的特點有哪些。

  1、柱塞設計,柱填裝體積可根據需要自行調整,一根柱管就可代替多根固定柱管;

  2、人性化設計,操作簡單,清洗方便,易于拆卸組裝;

  3、流路多為惰性材料,溶劑耐受性能好;

  4、篩板孔徑可自定義,適用于各種規(guī)格填料;

  5、無截留死體積,保證內部填料分布均勻,重現(xiàn)性好;

  6、關鍵部分采用PEEK材質,生物兼容性好;

  7、夾套可維持一定的熱穩(wěn)定操作溫度,針對敏感樣品純化具有冷卻外殼;

  8、BSXK空柱管材料為高硼硅玻璃,可以目測到柱床狀態(tài),及時進行色譜柱重新填裝,提高實驗效率;

  9、玻璃材質使分離過程更加直觀;

  10、種類豐富,可根據要求選定一端可調軸向壓縮和兩端可調軸向壓縮柱;

  應用范圍

  ●蛋白純化:用于從復雜混合物中純化出目標蛋白質,廣泛應用于生物制藥和生物化學研究。

  ●核酸純化:部分層析技術也可用于純化核酸等其他生物大分子。

  操作步驟

  ●裝柱:選擇適合的層析介質裝填入柱,確保介質均勻無氣泡。

  ●平衡:用緩沖液預先平衡層析柱,準備樣品上樣。

  ●上樣:將準備好的蛋白質樣品緩慢加入柱頂,避免擾動床層。

  ●洗脫:根據層析類型,采用適當的洗脫液將結合的蛋白質按順序從柱中洗脫出來。

  ●收集:從柱出口收集洗脫液,并進行檢測和分析,以獲得純化后的蛋白質

 

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